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[1]张佑红１,２,熊　瑶１,等.苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Ｇｐ６４基因的原核表达[J].武汉工程大学学报,2015,37(07):11-15.[doi:10. 3969/j. issn. 1674-2869. 2015. 07. 003]
　,,et al.Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏ ｖｉｒｕｓ Ｇｐ６４ ｇｅｎｅ[J].Journal of Wuhan Institute of Technology,2015,37(07):11-15.[doi:10. 3969/j. issn. 1674-2869. 2015. 07. 003]
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苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Ｇｐ６４基因的原核表达(/HTML)
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《武汉工程大学学报》[ISSN:1674-2869/CN:42-1779/TQ]

卷:
37
期数:
2015年07期
页码:
11-15
栏目:
化学与化学工程
出版日期:
2015-07-31

文章信息/Info

Title:
Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏ ｖｉｒｕｓ Ｇｐ６４ ｇｅｎｅ
文章编号:
1674-2869(2015)07-0011-05
作者:
张佑红１; ２;  熊　瑶１; ２; 周　锋１; ２; 徐智鹏１; ２; 谌　颉１; ２; 陈杏洲１; ２
1.武汉工程大学化工与制药学院，湖北 武汉 ４３００７４；２.绿色化工过程教育部重点实验室（武汉工程大学），湖北 武汉 ４３００７４
Author(s):
ＺＨＡＮＧ Ｙｏｕ－ｈｏｎｇ１; ２;  ＸＩＯＮＧ Ｙａｏ１; ２;  ＺＨＯＵ Ｆｅｎｇ１; ２; ＸＵ Ｚｈｉ－ｐｅｎｇ１; ２; ＣＨＥＮ Ｊｉｅ１; ２; ＣＨＥＮ Ｘｉｎｇ－ｚｈｏｕ１; ２
1.Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｗｕｈａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｗｕｈａｎ ４３００７４， Ｃｈｉｎａ；2.Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｇｒｅｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓ（Ｗｕｈａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｗｕｈａｎ ４３００７４， Ｃｈｉｎａ
关键词:
苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒; Ｇｐ６４蛋白; Ｇｐ６４基因; 表达; 纯化
Keywords:
ＡｃＭＮＰＶ; Ｇｐ６４ ｐｒｏｔｅｉｎ; Ｇｐ６４ ｇｅｎｅ; ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ; ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
分类号:
Ｑ７１
DOI:
10. 3969/j. issn. 1674-2869. 2015. 07. 003
文献标志码:
A
摘要:
苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒囊膜蛋白Ｇｐ６４是杆状病毒感染宿主细胞的重要功能蛋白之一. 通过Ｏｌｉｇｏ６．０设计一对特异性引物，用于扩增Ｇｐ６４基因的部分ＤＮＡ片段，对聚合酶链式反应扩增得到的ＤＮＡ片段进行纯化，并对纯化后的双酶切ＤＮＡ片段与经同尾酶双酶切后的原核表达载体 ｐＥＴ２８ａ进行连接；对捕获有重组质粒 ｐＥＴ２８ａ－Ｇｐ６４ 的大肠杆菌 ＢＬ２１（ＤＥ３） 细胞进行异丙基硫代半乳糖苷诱导，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对诱导产物进行电泳分析，结果表明扩增的目的片段获得了表达；采用电透析的方法纯化了该蛋白，为进一步制备抗Ｇｐ６４蛋白抗体做准备.
Abstract:
Ｇｐ６４ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｖｉｒｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｐｒｏｃｅｓｓ． Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｂｙ Ｏｌｉｇｏ６．０ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｙ ａ ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｓｉｌｋ ｗｏｒｍ ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏ ｖｉｒｕｓ Ｇｐ６４ ｇｅｎｅ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｔａｒｇｅｔ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｗａｓ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ｄｏｕｂｌｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＥｃｏＲⅠ ａｎｄ ＸｈｏⅠｗｈｉｌｅ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＥＴ２８ａ ｗａｓ ｃｕｔ ｂｙ ＥｃｏＲ Ｉ ａｎｄ Ｓａｌ Ｉ， ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ； Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３） ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｈａｄ ｃａｕｇｈｔ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄ ｐＥＴ２８ａ－ＧｐＰ６４ ｗere ｉｎｄｕｃｅｄ ｗｉｔｈ ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ－β－Ｄ－ｔｈｉｏｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ， ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗａｓ ｔｈｅｎ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ． Ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｔａｒｇｅｔ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ. Tｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｅｌｅｃｔｒｏ ｄｉａｌｙｓｉｓ， ｗｈｉｃｈ ｍａｋｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉ Ｇｐ６４ ａｎｔｉｂｏｄｙ．

参考文献/References:

［１］　ＫOST Ｔ Ａ， ＣONDREAY Ｊ Ｐ， ＪARVIS Ｄ Ｌ． Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ａｓ ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｉｎｓｅｃｔ ａｎｄ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５，２３（５）：５６７－５７５．［２］　ＣＨＥＪＡＮＯＶＳＫＹ Ｎ． Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｉｎｓｅｃｔ ｃｅｌｌ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］． Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００７（３８８）：４３５－４４６．［３］　ＳＴＥＷＡＲＴ Ｍ Ｅ， Ｂ Ｎ． Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｂｅａｋ ａｎｄ ｆｅａｔｈｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ （ＢＦＤＶ） ｃａｐｓｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ｓｅｌｆ－ａｓｓｅｍｂｌｙ ａｎｄ ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００７，１４１（２）：１８１－１８７．［４］　ＷＡＮＧ Ｓ， ＦＡＮＧ Ｌ． Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＧＰ５ ａｎｄ Ｍ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏ－ｍｅ ｖｉｒｕｓ ［Ｊ］． Ｖａｃｃｉｎｅ，２００７，２５（４９）：８２２０－８２２７．［５］　ＣＯＸ Ｍ Ｍ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖａｃｃｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２００８，１０（１）：５６－６１．［６］　ＪＡＮ Ｋ， ＳＩＬＶＩＡ Ｌ， ＮICOLA Ｇ Ａ． Ｔｈｅ ｐｏｓｔｆｕｓｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｇｐ６４ ｓｕｐｐｏｒｔｓ ａ ｕｎｉｆｉｅｄ ｖｉｅｗ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｆｕｓｉｏｎ ｍａｃｈｉｎｅｓ［Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ，２００８（１０）：１０２４－１０３０．［７］　ＬI Ｚ Ｆ， ＧARY Ｗ． Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ tｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ （ＴＭ） dｍａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ aｕｔｏｇｒａｐｈａ cａｌｉｆｏｒｎｉｃａ mｕｌｔｉｃａｐｓｉｄ nｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ ＧＰ６４ ｐｒｏｔｅｉｎ： sｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｏｆ hｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ＴＭ Ｄｏｍａｉｎｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００８（８）：３３２９－３３４１．［８］　ＬＩ ＺＦ， ＧＡＲＹ Ｗ． Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ＧＰ６４ dｉｓｕｌｆｉｄｅ bｏｎｄｓ： ｔｈｅ iｎｔｅｒｍｏｌｅｃｕｌａｒ dｉｓｕｌｆｉｄｅ bｏｎｄ ｏｆ aｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ mｕｌｔｉｃａｐｓｉｄ nｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ ＧＰ６４ iｓ nｏｔ eｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ mｅｍｂｒａｎｅ fｕｓｉｏｎ ａｎｄ vｉｒｉｏｎ Ｂｕｄｄｉｎｇ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２０１０（８）：８５８４－８５９５．［９］　李国辉，唐琦，胡朝阳．家蚕核型多角体病毒囊膜蛋白ＧＰ６４的原核表达［Ｊ］． 微生物学杂志，２０１１，３１（４）：９０～９４．ＬＩ Ｇｕｏ－ｈｕｉ， ＴＡＮＧ Ｑｉ， ＨＵ Ｚｈａｏ－ｙａｎｇ， et al． pｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ eｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ sｉｌｋ wｏｒｍ（bｏｍｂｙｘｍｏｒ）nｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ ＧＰ６４ gｅｎｅ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１１，３１（４）：９０-９４．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）［１０］　ＬＩＮＤＬＥＹ Ｋ Ｍ， ＳＵ Ｊ Ｌ， ＰＡＵＬＡ Ｋ． Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｄｉｓｐｌａｙｉｎｇ ｇｐ６４–ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０００，２３４（２）：１２３－１３５．［１１］　金晶，蔡亦红，类延花，等． ＨＣＭＶ ｐｐ６５ 截短蛋白原核表达条件优化［Ｊ］．微生物学志，２００５，２５（３）：２８-３２．ＪＩＮ Ｊｉｎｇ，ＣＡＩ Ｙｉ－ｈｏｎｇ，ＬＥＩ Ｙａｎ－ｈｕａ， ｅｔ ａｌ． Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ pｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ eｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ tｒｕｎｃａｔｅｄ ＨＣＭＶ ｐｐ６５ pｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００５，２５（３）：２８-３２．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）［１２］　徐智鹏， 张佑红， 陈杏洲， 等． 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Ｇｐ６４蛋白的优化表达［Ｊ］．湖北大学学报，２０１４，３６（１）：２１－２４．ＸＵ Ｚｈｉ－ｐｅｎｇ， ＺＨＡＮＧ Ｙｏｕ－ｈｏｎｇ， ＣＨＥＮ Ｘｉｎｇ－ｚｈｏｕ，ｅｔ ａｌ． Ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏ ｖｉｒｕｓ Ｇｐ６４ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ　Ｅ．ｃｏｌｉ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４，３６（１）：２１－２４．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）［１３］　黄轶，华超，徐江英，等． 透析袋电洗脱法在蛋白质回收和纯化中的应用［Ｊ］． 南京军医学报，２００３，２５（１）：３３-３４．ＨＵＡＮＧ Ｙｉ， ＨＵＡ Ｃｈａｏ， ＸＵ Ｊｉａｎｇ－ｙｉｎｇ， ｅｔ ａｌ． Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉａｌｙｓｉｓ ｂａｇ ｅｌｅｔｒｏｅｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Cｏｌｌｅｇｅ，２００３，２５（１）：３３-３４．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）［１4］　ＺＨＡＮＧ ＹＨ， ＷＥＩ Ｗ， ＸＵ Ｐ ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｐｈａｓｅ ａｆｆｅｃｔｓ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｒｅｐｌｉｃａｔｅ Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ［Ｊ］． Ａｃｔａ Vｉｒｏｌｏｇｉｃａ，２０１２，５６：１３３-１３７．

相似文献/References:

备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期:2015-03-30基金项目:湖北省自然科学重点基金(2013CF101)作者介绍:张佑红(1964-),男,湖南浏阳人,教授,博士研究生导师.研究方向:基因工程.
更新日期/Last Update: 2015-08-25