《武汉工程大学学报》  2012年4期 11-14   出版日期：2012-05-30   ISSN:1674-2869   CN:42-1779/TQ

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高效液相色谱法测定奥氮平的含量



0引言　　奥氮平（olanzapine）是美国礼来公司研究开发的非经典抗精神病药，为噻吩苯二氮类多巴胺(DA)和5\|羟色胺(5\|HT)拮抗剂，它能选择性作用于中脑边缘多巴胺通路，改善脑内多种神经通路功能，主要用于治疗精神分裂症、精神病性障碍和情感障碍等［1］.临床试验表明奥氮平能有效改善精神病理学的各个方面，疗效卓越且副作用轻微，尤其是锥体外系副反应（EPS）和迟发性运动障碍（TD）发生率很低［2］，因此目前奥氮平正成为治疗精神病性障碍的生力军.    口崩片作为一种新型片剂，具有服用简单方便、在口腔中能迅速崩解或溶解、吸收起效快以及能避免肝脏首过效应等优点［3］；由于其在精神疾病治疗方面有着独特的实用性，将抗精神病药奥氮平制备成口崩片，能提高患者药物治疗的依从性，减少护理工作的负担［4］.　　关于奥氮平药代动力学的报道常见于文献［5-8］，但关于其含量及有关物质测定的报道不多［9-10］，同时中国药典也未收录该药，因此缺乏相应的药品标准.本文在参照最新美国药典的基础上建立了奥氮平原料药及片剂含量测定的高效液相色谱法，同时应用于相应的质量和稳定性研究.实验结果表明方法灵敏度高、重复性好、专属性强，适合奥氮平及其片剂的含量测定和有关物质检查.1实验部分1.1仪器与试药　　Agilent 1200高效液相色谱仪（Degasser G1322A，Quat pump G1311A，ALS G1329A，TCC G1316A，VWD G1314D，美国Agilent公司）；Venusil ASB C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm，北京艾杰尔科技有限公司）；分析天平（Sartorius BT125D型，德国赛多利斯公司）；超声清洗仪（KS\|120D型，新芝仪器厂）.　　奥氮平对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100948\|200801），奥氮平原料药（军事医学科学院毒物药物研究所合成，批号20110831、20110930、20111010），奥氮平口崩片（自制，批号20111120、20111210、20111217），乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸、磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠为分析纯，水为双蒸水.1.2实验方法
1.2.1色谱条件色谱柱：Venusil ASB C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：缓冲液（含质量分数为0.69%磷酸二氢钠和质量分数为1.2%十二烷基硫酸钠，磷酸调节pH值为2.5）\|乙腈（45：55）；检测波长：259 nm；柱温：25 ℃；流速：1.5 mL·min-1；进样量：20 μL.
1.2.2溶液的配制对照品溶液：精密称取奥氮平对照品，流动相溶解、定容制成质量浓度为100 μg·mL-1的溶液，作为对照品溶液.　　奥氮平溶液：精密称取奥氮平原料药适量，配制方法同对照品溶液，作为原料药溶液.　　供试品溶液：取奥氮平口崩片20片，称重，研细至粉末；精密称取适量（相当于奥氮平30.00 mg），流动相溶解后用0.45 μm的有机滤膜过滤.流动相将续滤液稀释成100 μg·mL-1的溶液，作为供试品溶液.
1.2.3专属性试验酸破坏：取片剂研细粉末，流动相配制成0.5 mg·mL-1的溶液，加入0.5 mol·L-1HCl溶液适量，室温放置1 d，0.5 mol·L-1NaOH溶液中和后滤过，续滤液作为酸破坏样品溶液.　　碱破坏：取片剂研细粉末，流动相配制成0.5 mg·mL-1的溶液，加入0.1 mol·L-1NaOH溶液适量，室温放置2 d，0.1 mol·L-1HCl溶液中和后滤过，续滤液作为碱破坏样品溶液. 　　氧化破坏：取片剂研细粉末，流动相配制成0.5 mg·mL-1的溶液，加入30%的双氧水适量，室温放置5 d后滤过，续滤液作为氧化破坏样品溶液.　　高温破坏：取片剂研细粉末，于60 ℃条件下放置1 d， 流动相稀释定容制成浓度为100 μg·mL-1的溶液，滤过，续滤液作为高温破坏样品溶液.　　光照破坏：取片剂研细粉末，于4 500 lx强光条件下照射5 d，流动相稀释定容制成浓度为100 μg·mL-1的溶液，滤过，续滤液作为光照破坏样品溶液.    分别取奥氮平溶液、流动相、各种破坏样品溶液以及空白辅料溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定各溶液，记录色谱图至主峰保留时间的3倍.
第4期黄坤，等：高效液相色谱法测定奥氮平的含量
武汉工程大学学报第34卷
1.2.4线性关系精密称取奥氮平原料药，流动相溶解、稀释制备成浓度为20.33、50.83、81.32、101.65、121.98、152.48、203.30 μg·mL-1的系列标准溶液.按“2.1”项下的色谱条件测定各溶液，记录峰面积.以峰面积对浓度进行线性回归，计算标准方程及相关系数.
1.2.5重复性取奥氮平原料药和20111217批的片剂，按“2.2”项下的方法制备原料药溶液和高、中、低9份供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定，计算以标示量为基准的片剂含量及其RSD.
1.2.6中间精密度更换测定时间、高效液相色谱检测仪器和操作人员进行含量测定，具体试验方案同“2.5.1”.
1.2.7回收率分别精密称取奥氮平原料药约8.00、10.00、12.00 mg，置于100 mL容量瓶中，加入处方量辅料，按“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备回收率试验溶液.分别取该溶液及奥氮平原料药溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定，记录峰面积.按外标法计算方法的回收率及其RSD.
1.2.8溶液稳定性取奥氮平片剂研细粉末，按“2.2”项下供试品溶液的制备方法制备稳定性试验溶液.将其置于室温条件下，分别于0、1、2、4、6、8、12、24 h取该溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定，记录峰面积.计算峰面积的RSD，考察24 h内溶液的稳定性.
1.2.9检测限与定量限取“2.2”项下对照品溶液，用流动相逐步稀释，按“2.1”项下的色谱条件测定，按S/N=2计算检测限，按S/N=10计算定量限.
1.2.10含量测定与有关物质检查含量测定：分别取“2.2”项下的对照品溶液、原料药溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定，记录峰面积，按外标法计算原料药和片剂的含量.　　有关物质检查：取奥氮平原料药和片剂研碎粉末，按“2.2”项下原料药溶液和供试品溶液的配制方法制备成浓度为500 μg·mL-1供试品溶液.精密量取供试品溶液用流动相稀释成质量浓度为7.5 μg·mL-1的对照溶液.按“2.1”项下的色谱条件测定各溶液，记录供试品溶液的色谱图至主峰保留时间的3倍，计算杂质峰面积的总和（不包含溶剂峰和辅料峰），用主成分自身对照法计算原料药和片剂的有关物质含量.2结果与讨论2.1结果
2.1.1专属性试验表明在此色谱条件下，辅料与流动相对测定无干扰，主药能与破坏产生的降解产物有效分离（R>1.5），方法的专属性良好，结果见图1.
2.1.2线性回归得标准方程：Y=84.465X-92.104，R=0.999 8（n=7）；表明质量浓度在20.33～203.3 μg·mL-1范围内，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系.重复性试验测得片剂的平均含量为标示量的98.54%，RSD为0.61%，表明该方法重复性良好；中间精密度试验测得片剂的平均含量为标示量的98.07%，RSD为0.89%，证明该分析方法的中间精密度良好.图1奥氮平与降解产物的HPLC色谱图
Fig. 1 Chromatograms of olanzapine and degradation products 
注：a. 空白辅料；b. 流动相；c. 奥氮平溶液；d. 酸降解；e. 碱降解；f. 氧化降解；g. 高温降解；h. 光照降解；1\|奥氮平峰.2.1.3回收率试验按外标法计算得到方法的平均回收率为100.12%，RSD为0.33%，表明方法准确度良好，结果见表1.表1奥氮平回收率试验结果
Table 1Results of recovery test of olanzapine（n=2）
样品实际质量浓度/(μg·mL-1)检测质量浓度/(μg·mL-1)回收率/%平均回收率/%RSD/%180.280.4100.30279.780.1100.46381.681.7100.184100.2100.6100.40599.799.699.906102.3102.6100.337120.5120.499.938119.7118.999.379121.2121.5100.22100.120.332.1.4稳定性试验测得峰面积的RSD为0.18%，说明在24 h内溶液的稳定性良好.检测限与定量限试验测得奥氮平的检测限为1 ng，定量限为5 ng，表明方法灵敏度高.
2.1.5含量测定结果表明三批原料药的含量均在98.0%～102.0%之间，三批片剂的含量均在标示量的90.0%～110.0%之间，原料药与片剂的含量符合美国药典要求.有关物质检查结果表明三批原料药的总杂质质量分数均小于0.4%，三批片剂的总杂质质量分数均小于1.5%，原料药与片剂的杂质质量分数符合美国药典要求.结果见表2.
表2奥氮平含量测定与有关物质检查试验结果
Table 2Results of determination of content of
olanzapine and its impurities
样品批号含量/%有关物质/%奥氮平原料药20110831
20110930
20111010 99.9
99.8
99.50.08
0.07
0.08奥氮平口崩片20111120
20111210
20111217 98.2
97.5
99.3 0.19
0.20
0.172.2讨论a.本实验进行了相应的破坏性试验，结果表明奥氮平在酸、碱、氧化、高温和光照的条件下均有不同程度的降解；所产生的杂质均能与主药较好的分离，分离度大于1.5.同时试验结果表明在主药峰之后未出现其他杂质峰，因此在有关物质检查时可以适当缩短分析时间.b.本实验考察了不同的柱温（25～35 ℃）、不同流速（1～1.5 mL·min-1）、缓冲液与有机相不同配比（1∶1～1∶1.5）（体积比）的流动相系统，结果表明柱温为25 ℃、流动相为缓冲液（含质量分数0.69%磷酸二氢钠和质量分数1.2%十二烷基硫酸钠， pH值为2.5）\|乙腈（45∶55）（体积比）、流速为1.5 mL·min-1时，柱效较高，保留时间为6.2 min，主药峰与杂质峰能够有效的分离.c.本实验还考察了另一种测定奥氮平的流动相体系：缓冲液（含质量分数0.68%磷酸二氢钾和质量分数1%三乙胺， pH值为6.0）\|甲醇\|乙腈.实验结果表明其分离效果与“3.2”项下所采用方法相差不大，“3.2”项下流动相体系更为简单，因此采用其作为奥氮平HPLC含量测定方法的流动相.3结语    本研究在综合相关参考文献和药典的基础上，建立了一种简单的测定非经典抗精神病药奥氮平及其片剂的HPLC法，方法学验证结果表明方法灵敏度高、重复性好、专属性强，适合药物的含量测定和有关物质检查.该方法曾用于奥氮平的处方优化和质量研究，结果表明该方法简单快捷，适合药物的相关分析.参考文献：